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更新時間:2022-01-28
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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒說明書 | 可見分光光度法 微板法 | 48樣 96樣 | AS301 |
試劑組成和配制
提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體×5 瓶,-20℃避光保存。臨用前根據用量每瓶加入4.5mL試劑二充分混勻。(3天使用完)
樣品處理
1. 組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g 離心 5min,取全部上清于 4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于 1mL 試劑一。
2. 細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后于4℃,10000g 離心5min,取全部上清于4℃、100000g 離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
3. 血清:直接測定。
優點如下:
1、快速簡便:操作時間短,48-50T,可測40例樣本左右,96-100T,可測80例樣本左右;
2、取樣量微:常規操作取樣量50l, 酶標儀操作僅需5l即可檢測,部分試劑盒取樣多少請;
3、穩定性好:試劑盒2~8℃存放3個月有效;
4、再現性好:20倍稀釋線性仍然良好;
5、回收試驗: X =99%;
6、受外界影響因素小:干擾因素少,重復性強;
7、測試面廣:可測動物血清(漿)、組織、各種體液、灌流液、各種培養細胞以及細胞培養上清液等,部分試劑盒適用于檢測植物。
測定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后,應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發,板上應加蓋,或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當時,即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟,但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。
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