PCR檢測試劑盒對于不同的樣品有著不同的處理方法
點擊次數(shù):726 更新時間:2020-01-02
PCR檢測試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的試驗辦法。由于其試劑安穩(wěn)、易保存,操作簡便,成果判別較客觀等要素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)查驗的各領(lǐng)域中。ELISA試劑盒回收率是反響待測物在樣品分析進程中的損失的程度,損失越少,回收率越高。
通常我們可用于PCR檢測試劑盒檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證檢測的正確性和準確性的重要步驟,下面簡單介紹一下。
1、血清是zui常用于PCR檢測試劑盒檢測的一類樣本,處理也比較簡單。
用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
2、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,標本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,檢測時還應(yīng)仔細閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
3、細胞裂解液
1)吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細胞,加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。
2)收集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
3)加入適量的預(yù)冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。