染料法PCR試劑盒的使用注意事項及操作條件的選擇說明
點擊次數:787 更新時間:2019-11-20
染料法PCR試劑盒的使用注意事項及操作條件的選擇說明
染料法PCR試劑盒的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。
染料法PCR試劑盒的使用注意事項:
1、染料法PCR試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3、各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4、請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數。
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6、染料法PCR試劑盒的底物請避光保存。
7、嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
在進行染料法PCR試劑盒實驗時,各項條件的選擇也是非常重要的:
1、固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚苯乙烯、纖維素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不論使用哪一種載體,在使用前進行篩選:在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應的均一性如何,以此來判斷其吸附性能是否良好。
2、包被抗體的選擇:將抗體吸附在固相載體表面的時候,一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度,進行包被后,當其它試驗條件大致一樣的情況下,觀察陽性標本的OD值。選擇蛋白量少,OD值大的濃度。