轉錄因子抗體-1進口試劑盒說明書 試驗原理: ES試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知ES濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將ES和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中ES的濃度呈比例關系。 試劑盒性能: 1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。 2. 特異性:不與其它細胞因子反應。 3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。 操作步驟: 1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。 2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。 3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。 4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。 5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。 6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。 7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。 8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。 9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。 4、敏感度: 0.1 pg/ml 結果判斷與分析: 1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值 2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的ES標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的ES含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。 3、檢測值范圍:0-240pg/ml 操作注意事項: 1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。 2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。 3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。 4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。 5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。 7. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。 8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。 9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。 保存條件及有效期 1.試劑盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6 個月
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